La colecta se realizará con ayuda de una podadora aérea entre los meses de febrero a marzo. El color apropiado de las cápsulas debe ser marrón obscuro y éstas deben estar preferentemente cerradas. En general se encuentran de 60 - 80 semillas por cápsula, por lo que una cápsula sería suficiente, por seguridad se colectarán dos de cada árbol.
Siembra in – vitro
El proceso de desinfección de semillas consistirá en los siguientes pasos:
Desinfección de semillas con agua jabonosa y realizar enjuague.
Sumersión a una solución de alcohol al 70% y enjuagar.
Sumersión a una solución de cloro al 1% y enjuagar.
Imbibición 24 horas en agua destilada estéril.
Inmersión previa a la siembra en H2O2 (Peróxido de hidrógeno) para la eliminación de fenoles de la testa.
La siembra in - vitro se realizará en medio de cultivo B5 (Gamborg) bajo condiciones asépticas. Posterior a la germinación, las plántulas permanecerán en este medio de cultivo durante 4 meses (Armijos, com. per. 2013). Crecimiento in vitro Para el crecimiento in vitro, se utilizará el medio de cultivo B5, repicando a frascos individuales. Las plántulas permanecerán en este medio hasta que alcancen un tamaño aproximado de 5 – 7 cm. Si este tamaño no es alcanzado a los 4 meses, se requerirá un segundo repique al mismo medio (Armijos, com. per. 2013). Aclimatación y crecimiento en invernadero Las plántulas en condiciones in vitro que hayan alcanzado la altura establecida, serán llevadas al invernadero para iniciar el proceso de aclimatación o endurecimiento. Estas se plantarán en un sustrato compuesto de turba y casca de arroz (en proporción 2:1) y permanecerán por espacio de 6 - 8 meses hasta que alcancen una altura aproximada de 20 cm (Gusmán, com. per. 2013). Las condiciones ambientales en invernadero serán: temperatura de 22 a 30 ºC y humedad del 70 – 90 % (Gusmán, com. per. 2013). Refuerzo
Parcelas de actuaciónLas parcelas de plantación se han diseñado una densidad máxima estimada de 625 plantas por hectárea. Este valor se lo estimado en función de intentar poner una muestra de todo el germoplasma existente en la zona (28 plantas reproductoras), en el espacio más reducido posible teniendo en cuenta la arquitectura de las copas de los árboles de la especie (Garmendia, 2005) y la réplica de tres individuos provenientes de cada reproductor. Cada parcela tendrá un área de 1360 m2 con una distribución regular de 1 planta cada 4 metros, lo que equivale a 85 plantas por parcela. En total se establecerán 9 parcelas que juntas suman 12240 m2 de área de plantación (Figura 11.1).
Figura 11.1: Marco de plantación en cada parcela de Cinchona officinalis. Distribución espacial
La única referencia tangible que existe para identificar los sitios óptimos de plantación, son los dos núcleos poblacionales existentes y en concreto aquellas zonas donde mejor éxito ha tenido la escasa regeneración, por lo tanto se establecerán parcelas de plantación en cada una de éstas dos zonas.
Como se desconoce el resto de micrositios aptos para el establecimiento de nuevas parcelas, se pretende realizar un modelo de hábitat a escala de microcuenca para identificar al menos 7 potenciales sitios para establecer las siete parcelas de plantación restantes. De todas formas, en la figura 11.2 se muestra una imagen de la microcuenca y una hipotética distribución de las 9 parcelas de plantación dentro de los límites del bosque. En total se contará con 765 plantas. Figura 11.2: Distribución hipotética de las parcelas de plantación luego de realizar un modelamiento de hábitat en la microcuenca de estudio.
Todo el proceso de refuerzo se puede resumir en los siguientes pasos:
Inicio de plantación al final de la época más lluviosa (mayo - junio) (Cuadrilla de 4 personas para plantar y 4 para la toma de datos, formando equipos de dos personas).
Clareo de copas circundantes al sitio de plantación, en un radio de 2 m.
La cuadrilla en promedio plantará 112 plantas/día, empleando ahoyado manual. La siembra terminaría en 7 días aproximadamente.
Marcaje de sitio de plantación para efectos de monitoreo (cinta de color a 2 m del suelo y estaca de color con código de procedencia junto a la planta).
Registro de parámetros del sitio de plantación: inclinación de pendiente, profundidad de capa orgánica, textura y humedad del suelo, cobertura de copa, especie arbórea dominante. Estos datos se colectarán para generar una línea base que permita estandarizar un protocolo de plantación.
La colecta se realizará con ayuda de una podadora aérea entre los meses de febrero a marzo. El color apropiado de las cápsulas debe ser marrón obscuro y éstas deben estar preferentemente cerradas. En general se encuentran de 60 - 80 semillas por cápsula, por lo que una cápsula sería suficiente, por seguridad se colectarán dos de cada árbol.
Siembra in – vitro
El proceso de desinfección de semillas consistirá en los siguientes pasos:
La siembra in - vitro se realizará en medio de cultivo B5 (Gamborg) bajo condiciones asépticas. Posterior a la germinación, las plántulas permanecerán en este medio de cultivo durante 4 meses (Armijos, com. per. 2013).
Crecimiento in vitro
Para el crecimiento in vitro, se utilizará el medio de cultivo B5, repicando a frascos individuales. Las plántulas permanecerán en este medio hasta que alcancen un tamaño aproximado de 5 – 7 cm. Si este tamaño no es alcanzado a los 4 meses, se requerirá un segundo repique al mismo medio (Armijos, com. per. 2013).
Aclimatación y crecimiento en invernadero
Las plántulas en condiciones in vitro que hayan alcanzado la altura establecida, serán llevadas al invernadero para iniciar el proceso de aclimatación o endurecimiento. Estas se plantarán en un sustrato compuesto de turba y casca de arroz (en proporción 2:1) y permanecerán por espacio de 6 - 8 meses hasta que alcancen una altura aproximada de 20 cm (Gusmán, com. per. 2013).
Las condiciones ambientales en invernadero serán: temperatura de 22 a 30 ºC y humedad del 70 – 90 % (Gusmán, com. per. 2013).
Refuerzo
Parcelas de actuaciónLas parcelas de plantación se han diseñado una densidad máxima estimada de 625 plantas por hectárea. Este valor se lo estimado en función de intentar poner una muestra de todo el germoplasma existente en la zona (28 plantas reproductoras), en el espacio más reducido posible teniendo en cuenta la arquitectura de las copas de los árboles de la especie (Garmendia, 2005) y la réplica de tres individuos provenientes de cada reproductor. Cada parcela tendrá un área de 1360 m2 con una distribución regular de 1 planta cada 4 metros, lo que equivale a 85 plantas por parcela. En total se establecerán 9 parcelas que juntas suman 12240 m2 de área de plantación (Figura 11.1).
Figura 11.1: Marco de plantación en cada parcela de Cinchona officinalis.
Distribución espacial
La única referencia tangible que existe para identificar los sitios óptimos de plantación, son los dos núcleos poblacionales existentes y en concreto aquellas zonas donde mejor éxito ha tenido la escasa regeneración, por lo tanto se establecerán parcelas de plantación en cada una de éstas dos zonas.
Como se desconoce el resto de micrositios aptos para el establecimiento de nuevas parcelas, se pretende realizar un modelo de hábitat a escala de microcuenca para identificar al menos 7 potenciales sitios para establecer las siete parcelas de plantación restantes. De todas formas, en la figura 11.2 se muestra una imagen de la microcuenca y una hipotética distribución de las 9 parcelas de plantación dentro de los límites del bosque. En total se contará con 765 plantas.
Figura 11.2: Distribución hipotética de las parcelas de plantación luego de realizar un modelamiento de hábitat en la microcuenca de estudio.
Todo el proceso de refuerzo se puede resumir en los siguientes pasos: